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乳腺癌类器官作育基

货号： PRS-BCM-3D

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产品说明

　　乳腺癌类器官作育基是一款增进乳腺癌类器官体形状成和扩增的作育基。。。。该产品为无菌的液体混淆系统，，，，，含有维持目的细胞生长所必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物以及生长因子等。。。。该作育基的奇异配方可以提供一个合适的细胞所需营养情形，，，，，增进人乳腺癌类器官的体外生长和扩增。。。。

使用说明

　　4℃避光生涯1个月内有用。。。。

　　1. 乳腺癌类器官作育

（1）消化后的细胞悬液举行计数。。。。

（2）按每孔1~2×10⁴个细胞密度盘算所需细胞数，，，，，凭证盘算好的体积吸收细胞悬液加入预冷的1.5 mL离心管中，，，，，离心，，，，，弃上清，，，，，将细胞沉淀置于冰上。。。。

（3）按1：2体积比，，，，，将一份体积的含1%BSA的DMEM加入2份体积的细胞外基质胶（Corning#356231）中，，，，，轻轻混匀（全程冰上操作），，，，，然后在冰上将配好的基质胶混淆液与细胞沉淀充分混匀。。。。

（4）将细胞沉淀与基质胶的混淆液凭证35 μL/孔滴在已提前预热好的24孔板中央，，，，，使之形成圆顶状胶滴。。。�；；；；；；郝赴饔逡浦磷饔渲辽�30 min。。。。

（5）待基质胶完全凝固，，，，，沿24孔壁缓慢加入1 mL/孔预先恢复至室温的本类器官作育基，，，，，并将作育板置于37℃，，，，，5%CO₂条件下静置作育。。。。

（6）镜下视察类器官形成情形，，，，，每3~4天替换一次作育基。。。。

　　2. 乳腺癌类器官的网络

（1）弃作育基，，，，，每孔加入1 mL预冷的无血清DMEM:F12作育基并用该作育基润洗枪头，，，，，重复奏乐至圆顶状胶滴完全脱离板底，，，，，将孔内吹散后的类器官混淆液网络至15 mL离心管中。。。。重复操作一次。。。。将两次洗脱下来的类器官混淆液合并网络至统一离心管中，，，，，1500 rpm离心5 min，，，，，轻轻吸去上清和基质胶层，，，，，沉淀待用。。。。

（2）沉淀加入3-5 mL类器官解离试剂（PRS-ODR），，，，，37℃，，，，，200 rpm水平摇床上解离10 min（详细解离时间凭证类器官巨细和数目决议，，，，，以肉眼可见颗粒显着减小一半为准，，，，，可中途取解离的类器官显微镜下视察，，，，，类器官解离至平均包括有5~10个细胞的细胞团块巨细最佳）。。。。

（3）解离竣事后加入息争离试剂等体积的含10%FBS的DMEM稀释。。。。1500 rpm离心3 min，，，，，弃上清，，，，，待用。。。。

　　3. 乳腺癌类器官传代

（1）网络好的细胞沉淀（以无肉眼可见基质胶状沉淀为准）加入1~2 mL预冷的含1%BSA的DMEM作育基重悬，，，，，在4℃下，，，，，1500 rpm，，，，，离心5 min。。。。

（2）小心吸弃上清，，，，，沉淀用乳腺癌类器官作育基重悬计数。。。。

（3）凭证办法3（2）~（6）的操作，，，，，以约莫1000个类器官/孔密度重新接种类器官，，，，，并继续扩着述育。。。。

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